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實驗斑馬魚繁殖和飼育

斑馬魚Danio rerio(Brachydanio rerio)原產於印度、孟加拉等國,屬鯉科。斑馬魚體小、卵大、卵徑1~1.5mm,繁殖週期快,成魚約4~6月可繁殖下一子代,目前已成為研究脊椎動物胚胎發育及對外界環境變化,如農藥、工業污水、毒性物質等對人類影響的良好研究材料,是一種極好的實驗模式魚。

斑馬魚最佳飼養環境需有適量微量元素之鈣鎂離子、本公司建議濾材套餐為(AZ-SKIT-01) -濾材介紹及套餐組

高級濾材套餐1號 (AZ-SKIT-01):

標準集成基本濾材一式(一年份):

  1. 鈣鎂離子濾材- 增加微量元素鈣鎂離子及培菌
  2. 遠紅外線離子 - 活化水離子及培菌
  3. 負離子濾材 - 沈澱水中雜質及培菌
  4. 六角石英培菌環 - 培菌用
  5. 活性碳 - 淨化水質及除臭

 


1. 生長環境

斑馬魚適宜的生長溫度為24-30度C,能夠忍受的溫度約10度C~40度C,在低溫環境下的忍受能力要強於高溫環境。其最適的生長和繁殖溫度為28.5度C。一般斑馬魚養殖用水的pH值應在7-8範圍內,屬於淡水魚養殖的適宜範圍。不同地區水質差別很大,如果系統當地的水質合適,可以用曝氣水直接養殖,否則就要用蒸餾水或去離子水加入適量的礦物質鹽,也可以配置本公司斑馬魚卵培養液進行養殖。

建議使用本公司斑馬魚培養液養殖

卵孵化期幾乎不需要氧氣,出生後7天開始需要氧氣的供應,隨著魚不斷長大,氧氣的需求量逐漸增加。在養殖過程中,水體中充氧有利於斑馬魚的發育。水體中過多的含氮廢物會對斑馬魚造成毒害作用。

斑馬魚對餌料的要求不高,人工配合餌料及各種鮮活餌料均可。但為保證斑馬魚較好的繁殖和生長,最好多種餌料結合投餵。在不同的發育時期選用鮮活餌料的種類不同。在斑馬魚仔魚階段,可以投餵草履蟲、輪蟲、酵母等作為其開口餌料(本公司GENDANIO有售);隨著斑馬魚的長大,餌料也變得豐富起來,可以投食活體餌料,如活體豐年蝦等(本公司GENDANIO有售)。對斑馬魚的性腺發育可以起到一定的促進作用,因此在親魚培育時,適量增加活體餌料會縮短其性腺發育週期。

2. 斑馬魚的繁殖

斑馬魚體型為紡錘形,雌雄容易鑒別。雌魚的藍色條紋偏藍而鮮艷,間以銀灰色條紋,身體比雄魚粗壯,尤其是腹部膨大,各鰭均比雄魚短小,但不明顯;雄魚藍色條紋偏黃,間以檸檬色條紋,身體細長扁平,沒有明顯突出的腹部。雌魚的體高/體長比要明顯高於雄魚。

斑馬魚產卵親魚的培育斑馬魚在繁殖時通過光週期作用,在日出後產卵。為促進斑馬魚的成熟,我們在水族箱內按照雌雄1:2~1:3的比例放人斑馬魚,控制光週期為14:10(14小時光照,l0小時黑暗),水體溫度恆定為28.5左右。增加投餵次數,可以由原來的每天投餵2~3次增加為4次,並且增加鮮活餌料(如活體豐年蝦)的投餵。

自然產卵

斑馬魚一般1O~12周即可達到性成熟,但最好用17~18月齡的F0親魚進行大規模繁殖。斑馬魚為異體體外受精。溫度適合時一年四季都可產卵,卵量3O0~1000粒,為非粘性沈性卵。在繁殖的前一天,天黑前(如是人工控制光週期,則指暗週期前)用隔板將繁殖的親魚分開,並在水箱底部平鋪一層玻璃珠或者隔離網以防止親魚產卵後吞卵。次日清晨,將中隔板拿掉,在光照的刺激下,雄魚會開始追逐雌魚,並用身體衝撞雌魚的腹部並交尾,這時雌魚產卵,雄魚排精,受精卵落人玻璃珠間隙或者隔離網下。結束後將親魚放出,用虹吸的方法收集受精卵。將虹吸出的受精卵以及各種污物(包括成魚的糞便,破碎的卵粒等)一同倒人培養皿中,用滴管(滴管口部一定要圓滑並且直徑要大於卵徑)將卵依次吸出,並用斑馬魚培養液清洗數次,然後放人培養箱中進行孵化。

 

斑馬魚配對、產卵、飼育、孵化
- 建議使用本公司GENDANIO 產卵配對盒組

飼養: 以光週期14h光照:10h黑暗飼養,餵食營養食物(如豐年蝦及斑馬魚專用飼料),公母分缸飼養5~7天。

配對: 實驗前一天,將公魚與母魚分類於產卵缸兩側或隔開,公魚比母魚為1:1或2:1。置產卵缸於incubator或飼養缸內,恆溫28.5度C左右。加蓋可防止跳走,關上incubator黑暗及靜置過夜,含氧水無需額外打氣。

產卵: 從incubator取出要產卵之配對組,將其混合或隔板打開, 加以光照射,1~3小時內看到斑馬魚進行交配行為。母魚會一次把全部腹中的卵包括卵囊全部排出,一胎約會生出300-500顆卵。排出後母魚會重新產生新的卵,約3-5天就可以再生下一次卵。

收卵及孵化(詳後面介紹): Wild type或經Transgenic(Microinjection)處理,加少許甲基藍抑制水霉生長。

人工授精

在人工授精的前一天挑選出一個月以上沒有進行過人工授精且發育良好的親魚,並準備好紗布和冰塊(麻醉斑馬魚用),使用本公司斑馬魚培養液。次日清晨,將雄魚浸入冰水中,待其不動時撈出,魚體洗淨後,用紗布擦乾,特別是生殖孔周圍,然後輕輕擠壓雄魚腹部,當有乳狀精液流出時,用吸管輕輕吸出,連續收集數尾魚精液後,將精液用預冷的斑馬魚培養液稀釋,精子在冷卻的斑馬魚培養液中可保持90min甚至更長的授精能力。由於雄斑馬魚的性腺不很發達,不容易採集精液,也可以採取解剖取性腺的方法,取出精巢後,在斑馬魚培養液中剪碎,可收到同樣的效果。卵子同樣在清晨採集,前期處理與雄魚相同。冷水麻醉後,輕輕擠壓魚腹部,如魚發育良好,可以輕易擠出卵子,將魚卵收集人小培養皿中,注意卵子不能沾水,否則卵吸水膨脹,會阻礙精子進入卵子。成熟的卵子為黃色,半透明狀。如果卵內有較多的白點,則表明卵在雌魚體內的時間過長已經腐化,會大大影響受精率。卵子取出後,迅速將稀釋的精子與卵子混勻,然後加入少量清水或者魚用生理鹽水,授精時間從加水時開始計算。人工授精的難點在於掌握斑馬魚的發育時期,一定要在最合適的時期收集精卵,這樣可以大大提高受精率,人工授精的斑馬魚親魚要再培育3~4周後才能再次用於人工授精。

卵的孵化

斑馬魚的受精卵及時沖洗乾淨後,將受精卵中內部呈白色的死卵剔除。孵化水溫一般25~28度C,在這個溫度範圍內溫度越低,孵化所需要的時間相應越長。水溫25度C時,受精卵經48~72小時孵出仔魚;水溫28度C時,約36小時孵出仔魚。實驗室孵化時可以在培養皿(dish 或 6 well ELISA plate)中進行,可以不充氣。為預防魚卵被細菌感染可以加入幾滴1‰的斑馬魚培養液。孵化過程中,要定期觀察,隨時剔除死卵。每5~6小時換一次水,水溫不宜相差太大,可以提前將新水放置人培養箱(本公司GENDANIO有售)中備用。斑馬魚的胚胎發育可分為7個時期,即受精卵期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、體節期、咽部期、孵化期。

幼仔魚的培育:
- 可本公司專案代飼養至一個月,度過養殖高危險期,高存活率。

在28度C下,大約36小時,斑馬魚幼體破膜孵出,仔魚僅在受到刺激時才會產生應激反應,游動一段距離後又靜止到水底。再2~3天後仔魚卵黃囊消失,鰾充氣後就可以平游並攝食,此時大概是受精出生後第7天(7dpf)。這一時期是幼仔魚存活的高危險時期,水霉菌、水溫的劇烈變化以及溶解氧不足均會造成仔魚的死亡。斑馬魚的開口期也是另一個高危期,魚平游後,如果餌料不適合或者投餵時間過晚,均會造成仔魚的死亡。可以投餵用篩網過濾過的動物性餌料或者配合餌料(本公司GENDANIO有售),此時投餵密度應該稍微大些,或水體容積較少,因為仔魚的游泳能力較弱,活動範圍較小,僅能攝食身邊的餌料。由於餌料容易污染水質,應該定期換水,防止水質惡化 一周以後可以投餵草履蟲輪蟲等(本公司GENDANIO有售);大約三周左右可以投餵豐年蝦的無節幼蟲;一個月後可以投餵配合餌料(100-400micro Zeiglar飼料本公司GENDANIO有售),注意初期應該盡量使餌料顆粒適口。

日常管理

實驗室內可以用自來水養殖,但是養殖和換水時要注意,所用自來水要曝氣一天以上,換水時要將水溫調節到和水族箱中的水溫相同。每天投餵2~3次,預實驗繁殖用親魚可以加餵一次,投餵量以5分鐘內吃完為準。投餵次數不要太多,否則魚的身體發胖會影響其性腺發育。如果投餵活體餌料,如豐年蝦等(本公司GENDANIO有售),可以先用高錳酸鉀消毒或用鹽水浸泡,自來水沖洗後再投餵。冷凍餌料必須解凍後方可投餵,否則解凍滲出的液體會污染水質。請注意為乾淨來源,否則不建議使用冷涷餌料。

在日常的養殖中,所用的日常用具,如GENDANIO-AQUAZOO系統,濾水設備等都應及時消毒,也可以用紫外線燈殺菌(本公司GENDANIO有售)或者日曬滅菌,以備下次再用。

本公司由斑馬魚實驗室畢業專業人員服務,能提供您實驗上幫助。
以上所需材料及實驗設備本公司皆有售,如有需求請向本公司詢問。

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